星形膠質(zhì)細(xì)胞（astrocyte，AST），是哺乳動(dòng)物大腦中體積最大的膠質(zhì)細(xì)胞，占整個(gè)膠質(zhì)細(xì)胞的20%~40%。星形膠質(zhì)細(xì)胞在中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central nervous system，CNS）中發(fā)揮重要作用，如參與突觸形成 、維持細(xì)胞內(nèi)外離子濃度恒定、參與神經(jīng)遞質(zhì)的傳遞、形成并維持血腦屏障。

本期細(xì)胞學(xué)堂為您整理了星形膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞的分類(lèi)、鑒定、原代分離培養(yǎng)步驟及注意事項(xiàng)，幫助大家快速上手、開(kāi)展實(shí)驗(yàn)~

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art 01、星形膠質(zhì)細(xì)胞分類(lèi)

星形膠質(zhì)細(xì)胞（AST）傳統(tǒng)分為兩種：

01、纖維性AST

多分布在白質(zhì)，細(xì)胞突起細(xì)長(zhǎng)，分支較少，胞質(zhì)內(nèi)含大量膠質(zhì)絲。組成膠質(zhì)絲蛋白質(zhì)稱膠質(zhì)纖維酸性蛋白質(zhì)(glialf ibrillaryacidicprotein，GFAP)。

纖維性星形膠質(zhì)細(xì)胞

02、原漿性AST

多分布在灰質(zhì)，細(xì)胞突起較短粗，分支較多，胞質(zhì)內(nèi)膠質(zhì)較少。

原漿性星形膠質(zhì)細(xì)胞

Part 02、形態(tài)和鑒定

普諾賽提取的大鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞鑒定圖

GFAP是星形膠質(zhì)細(xì)胞的骨架蛋白。胚胎神經(jīng)發(fā)育早期星形膠質(zhì)細(xì)胞前體的中間絲一般以波形蛋白為主，在星形膠質(zhì)細(xì)胞成熟時(shí)波形蛋白的表達(dá)水平降低，而GFAP表達(dá)增加并貫穿一生，因此，GFAP被公-認(rèn)為星形膠質(zhì)細(xì)胞的特征性標(biāo)記物。生理情況下腦內(nèi)少有表達(dá)，在病理狀態(tài)下出現(xiàn)反應(yīng)性上調(diào)，其上調(diào)機(jī)制尚未完-全闡明。[1]

嚙齒動(dòng)物和人類(lèi)原生質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的比較[2]

A: 典型的小鼠原生質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞。GFAP，白色。bar=20μm。

B: 相同規(guī)模的典型人類(lèi)原質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞。bar=20μm。

C和D：人原生質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞是小鼠星形膠質(zhì)細(xì)胞的2.55倍。

E: 小鼠原質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞用DiI（白色）和sytox（藍(lán)色）雙極標(biāo)記，顯示了星形膠質(zhì)細(xì)胞的完整結(jié)構(gòu)，包括其眾多的精細(xì)過(guò)程。bar=20μm。

F: 人類(lèi)星形膠質(zhì)細(xì)胞的立體標(biāo)記顯示了定義人類(lèi)原生質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的高度復(fù)雜的精細(xì)過(guò)程網(wǎng)絡(luò)。bar=20μm。[2]

Part 03、原代分離

1、從1-3天的新生鼠大腦組織初步分離細(xì)胞；

2、通過(guò)0.25%胰酶消化分離腦細(xì)胞；

3、獲得混合細(xì)胞后，經(jīng)300g離心10min，多次離心減少雜細(xì)胞；

4、差速貼壁30min~60min去除成纖維細(xì)胞；

5、后續(xù)培養(yǎng)換液時(shí)多次震蕩，持續(xù)純化細(xì)胞。

Part 04、培養(yǎng)注意事項(xiàng)：

星形膠質(zhì)細(xì)胞參考貼壁細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)方法培養(yǎng)即可，以下為培養(yǎng)時(shí)的3個(gè)注意事項(xiàng)：

① 可用常規(guī)0.25%胰酶消化；

② 可傳3代左右，持續(xù)傳代細(xì)胞形態(tài)會(huì)有少許變化；

③ 營(yíng)養(yǎng)需求較低，普通培養(yǎng)基亦可生長(zhǎng)，添加神經(jīng)生長(zhǎng)因子后更利于形態(tài)維持和細(xì)胞增殖。